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Technical articles賽默飛CFX96實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀是一款高效能的基因檢測(cè)平臺(tái),擁有強(qiáng)大的檢測(cè)通量和靈敏度,滿(mǎn)足不同領(lǐng)域的研究和檢測(cè)需求。其特點(diǎn)包括:
96孔板高通量設(shè)計(jì):一次實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蛱幚?6個(gè)樣本,適合高通量篩選、臨床診斷及大規(guī)?;虮磉_(dá)檢測(cè)。
五通道熒光檢測(cè)系統(tǒng):配備五個(gè)獨(dú)立熒光檢測(cè)通道,允許用戶(hù)進(jìn)行多重PCR反應(yīng),一次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)檢測(cè)多個(gè)靶標(biāo)基因,大大提升實(shí)驗(yàn)效率。
快速升降溫技術(shù):采用精確的熱循環(huán)系統(tǒng),溫控精度高,能夠顯著縮短PCR循環(huán)時(shí)間,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。
實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)監(jiān)控與分析:配套的軟件可以進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光信號(hào)監(jiān)控,提供即時(shí)數(shù)據(jù)分析和結(jié)果可視化,極大地方便了實(shí)驗(yàn)進(jìn)程中的決策。
高度靈活的實(shí)驗(yàn)設(shè)置:支持靈活的程序編排,用戶(hù)可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求自由設(shè)置溫度、時(shí)間及循環(huán)參數(shù),適用于不同類(lèi)型的PCR實(shí)驗(yàn)。
CFX96在多個(gè)領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用,適應(yīng)不同的科研與臨床需求:
基因表達(dá)定量分析:可用于研究基因的相對(duì)或絕對(duì)表達(dá)水平,適用于功能基因研究及藥物研發(fā)中的靶點(diǎn)篩選。
病原體檢測(cè):在臨床上廣泛用于病毒、細(xì)菌等病原微生物的快速檢測(cè),包括新興傳染病的診斷及防控。
SNP基因分型:能夠精確檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性,用于遺傳學(xué)研究和藥物基因組學(xué)中的個(gè)性化醫(yī)療方案開(kāi)發(fā)。
基因突變分析:通過(guò)特異性引物和探針設(shè)計(jì),可檢測(cè)基因突變點(diǎn),尤其適合癌癥突變研究和遺傳病檢測(cè)。
食品與環(huán)境安全檢測(cè):適用于轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)、環(huán)境樣本中的微生物監(jiān)控等領(lǐng)域。
樣本準(zhǔn)備:從生物樣本中提取DNA或RNA,隨后進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄(如果是RNA樣品),以制備cDNA。準(zhǔn)備好含有引物、探針及熒光染料的PCR反應(yīng)混合物。
樣本加載:將PCR反應(yīng)混合物分裝至96孔板中,密封光學(xué)封板以避免污染。
實(shí)驗(yàn)設(shè)置:在CFX96的控制軟件中設(shè)置好PCR反應(yīng)條件,包括變性、退火、延伸等步驟的時(shí)間和溫度。選擇合適的熒光檢測(cè)通道。
實(shí)驗(yàn)運(yùn)行與監(jiān)控:?jiǎn)?dòng)儀器,系統(tǒng)會(huì)實(shí)時(shí)監(jiān)控?zé)晒庑盘?hào)的變化,用戶(hù)可以隨時(shí)查看擴(kuò)增曲線和Ct值。
結(jié)果分析與導(dǎo)出:實(shí)驗(yàn)完成后,利用軟件自動(dòng)生成標(biāo)準(zhǔn)曲線和Ct值報(bào)告,分析基因表達(dá)或病原體載量。
賽默飛CFX96實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的標(biāo)準(zhǔn)貨號(hào)為1855195。用戶(hù)在采購(gòu)時(shí)需根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇適合的配置,并確認(rèn)具體貨號(hào)。
賽默飛CFX96的核心工作原理是基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)。每個(gè)PCR反應(yīng)循環(huán)中,模板DNA經(jīng)歷變性、退火和延伸三個(gè)步驟,DNA的擴(kuò)增伴隨著熒光染料的結(jié)合。熒光信號(hào)在每個(gè)循環(huán)中逐漸增強(qiáng),儀器通過(guò)內(nèi)置的光電檢測(cè)器實(shí)時(shí)捕捉熒光信號(hào),生成擴(kuò)增曲線并確定Ct值(Cycle threshold)。Ct值越低,說(shuō)明樣品中靶標(biāo)基因的初始濃度越高。通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)比,能夠定量分析樣本中的DNA或RNA濃度。
引物與探針設(shè)計(jì):確保引物和探針的設(shè)計(jì)特異性高、退火溫度匹配,避免非特異性擴(kuò)增,提升實(shí)驗(yàn)可靠性。
反應(yīng)體系優(yōu)化:針對(duì)不同實(shí)驗(yàn)體系,優(yōu)化Mg2+、dNTPs、Taq酶等反應(yīng)物的濃度,確保最佳擴(kuò)增效率。
標(biāo)準(zhǔn)曲線構(gòu)建:使用已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,確保實(shí)驗(yàn)定量分析的準(zhǔn)確性。
防止交叉污染:確保實(shí)驗(yàn)操作在無(wú)菌條件下進(jìn)行,特別是在樣本裝載和光學(xué)封板步驟,避免氣溶膠污染。
數(shù)據(jù)分析與結(jié)果驗(yàn)證:實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)的變化,分析結(jié)果時(shí)注意樣本中的背景熒光干擾,必要時(shí)使用多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)確保數(shù)據(jù)可靠性。
檢測(cè)通量:一次最多可處理96個(gè)樣本,適合大規(guī)模實(shí)驗(yàn)和高通量分析。
熒光檢測(cè)通道:五通道光學(xué)系統(tǒng),能夠同時(shí)監(jiān)測(cè)多種熒光信號(hào),用于多重PCR實(shí)驗(yàn)中的靶標(biāo)基因檢測(cè)。
靈敏度:檢測(cè)靈敏度高,可檢測(cè)單拷貝水平的DNA或RNA樣本,適合低豐度基因檢測(cè)需求。
動(dòng)態(tài)范圍:寬廣的線性動(dòng)態(tài)范圍,通常在10^1至10^9拷貝之間,保證了基因表達(dá)的高精度定量。
溫控性能:CFX96的溫控系統(tǒng)精度為±0.2℃,并具有良好的孔間溫度均一性,確保所有樣本的反應(yīng)一致性。
擴(kuò)增速度:通過(guò)快速循環(huán)技術(shù),可以在較短時(shí)間內(nèi)完成一次完整的PCR實(shí)驗(yàn),提升實(shí)驗(yàn)室的工作效率。
賽默飛CFX96實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀憑借其高精度、快速、靈活的實(shí)驗(yàn)操作能力,成為生命科學(xué)研究、醫(yī)學(xué)檢測(cè)和基因組學(xué)研究中的工具。其多通道檢測(cè)、高靈敏度與數(shù)據(jù)自動(dòng)化分析功能,為科研工作者提供了理想的實(shí)驗(yàn)平臺(tái),助力科研與臨床的快速發(fā)展。